ADN complementario
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El ADN complementario o ADNc es un ADN de cadena sencilla. Se sintetiza a partir de una hebra simple de ARNm maduro. Se suele utilizar para la clonación de genes eucariotas en células procariotas.
[editar] Introducción
El dogma central de la biología molecular dice que durante la síntesis de proteínas, el ADN es transcrito en ARNm, que a su vez es traducido a proteínas. Una diferencia entre ARNm eucariótico y procariótico es que el RNAm eucariótico puede contener intrones, secuencias no codificantes que deben ser extraídas del ARNm antes de ser traducido a proteínas. El ARNm procariótico no tiene intrones, así que no sufre ningún proceso de corte (splicing).
A veces se quieren expresar genes eucariotas en células procariotas. Un método simple de hacerlo es insertar ADN eucariótico en un hospedador procariota, que transcribiría el ADN en ARNm y luego lo traduciría a proteínas. Pero como el ADN eucariota tiene intrones, y los procariotas carecen de mecanismos para eliminarlos, el proceso de extracción debe realizarse antes de introducir el DNA eucariota en el hospedador (además, debe ser metilado y hay que añadirle una región promotora procariota). Este ADN despojado de intrones es el ADN complementario, o ADNc.
[editar] Síntesis
Aunque existen varios métodos de síntesis, el ADNc es sintetizado casi siempre de ARNm maduro (sin secuencias intrónicas) utilizando la enzima retrotranscriptasa. Esta enzima trabaja sobre un molde de cadena simple de ARN, creando el ADN complementario basado en la correspondencia de bases ARN (A, U, G, C) con las bases ADN complementarias (T, A, C, G).
Para la obtención de ADN eucariota cuyos intrones han sido eliminados:
- Una célula eucariota transcribe el ADN a ARNm.
- La misma célula procesa la nueva cadena de ARNm eliminando los intrones, y añadiendo una cola poli-A y un terminal GTP.
- Esta cadena de ARNm maduro se extrae de la célula.
- Se hibrida un oligoncleótido poli-T sobre la cola poli-A del molde de ARNm maduro, ya que la retrotranscriptasa necesita un cebador de doble cadena para comenzar a trabajar.
- Se añade la retrotranscriptasa, junto con las bases A, T, C y G.
La retrotranscriptasa va recorriendo la cadena de ARNm y sintetizando la cadena de ADN complementaria del molde de ARNm (ADNc).
[editar] Aplicación
El ADNc se utiliza a menudo en clonación de genes, en pruebas de genes o en la creación de librerías de ADNc.
