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Le phage lambda (Enterobacteria phage λ) est un virus bactériophage qui infecte la bactérie Escherichia coli. Il est largement utilisé comme vecteur de clonage de l'ADN.
Le bactériophage lambda est un virus d'E.Coli dont l'ADN double brin linéaire de 48,5kb est entièrement séquencé. Les extrémités de cette molécule d'ADN forment une séquence nommée Cos : ce sont des extrémités complémentaires de 12 nucléotides pouvant s'apparier et ainsi circulariser le génome (séquences cohésives). Le phage lambda es sujet à deux cycles d'évolution possible : le cycle lytique (qui conduit à la mort de la cellule hôte, en l'occurence Escherichia coli), et le cycle lysogène durant lequel il insère son génome dans celui de la bactérie et subit des replications en même temps que le reste du génome bactérien. Il peut ainsi se propager. Ce cycle aboutit généralement à un cycle lytique et à l'excision du génome phagique hors du génome bacterien.